产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理而开发的高效检测试剂盒，具备以下优势：

1. 即开即用

用户只需提供样品DNA模板，即可迅速启动实验，无需复杂的准备过程。

2. 高灵敏度

经过优化的引物及其他组分，确保检测的灵敏度显著提高。

3. 附带阳性对照

提供阳性对照，方便用户区分假阴性样品，确保实验结果可靠。

4. 优秀的特异性

引物设计依据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，确保不与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. 多用途检测

本产品同时支持定性和定量检测。当用于定量时，其线性范围可达至少5个数量级。

6. 充分的实验次数

产品可以支持50次20μL的探针法荧光定量PCR反应，助力大规模实验的开展。

7. 科研专用

本产品仅限于科研用途，确保科研工作的专注与准确。

操作指南

一、DNA提取（样本制备区）
采用自选方法提取纯化样品DNA。本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。选择合适的提取方法，以获取高质量的DNA样本。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）
由于阳性对照浓度较高，请在独立区域进行下列稀释操作，以避免污染样品或其他试剂成分。

1. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
2. 使用带芯枪头，分别加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，获得1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
4. 重置枪头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，放冰上待用。
5. 依此类推，直到产生6个稀释度的标准曲线样品，放冰待用。
6. 需制作标准曲线时，将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）
根据待检样品的数量准备N+2个qPCR管，并向各PCR管中加入必要成分（详见说明书，欢迎咨询鸿运国际）。

四、添加模板（模板添加区）
向qPCR管中依次加入2μL的模板，加入顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒后，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）
将PCR管放置于PCR扩增仪的相应槽位进行扩增，具体程序参见说明书（欢迎咨询鸿运国际）。

六、结果分析
1. 若制作了标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，通过待测样品的Ct值从标准曲线推算样品DNA浓度的log值。
2. 如果未制作标准曲线，结果判定如下：阳性对照：Ct值<30，有明显的指数增长，呈现典型的S型曲线；阴性对照：Ct值为38或无Ct值，无明显的指数增长期和平台期；样本检测结果：Ct值<35，说明样本中存在婴儿利什曼虫，为阳性；Ct值在35-38之间应进行复检，如复检结果仍为Ct值在该范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存：低温运输，保存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。

选择鸿运国际的检测试剂盒，助您在生物医疗研究中获得准确、可靠的结果！