在进行细胞培养时，必须遵循一定的培养条件。气相应维持在95%空气和5%二氧化碳的比例下，温度保持在37℃，配方可以选择F12K培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S）。

所使用的细胞系为A549细胞，该细胞由DJGriad通过肺癌组织移植而获得，患者为58岁白人男性。A549细胞具有通过胞苷二磷酸胆碱路径合成高含量不饱和脂肪酸卵磷脂的能力。

传代方法

根据实际情况进行细胞传代时，第一次传代建议使用1:2的比例。在细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基并放入37℃、5% CO₂的培养箱中孵育；如果细胞密度超过80%，则可以直接进行传代。

培养液更换

每两天需更换一次培养液，以保持细胞健康生长。在细胞培养期间，建议同时购买鸿运国际的培养基，以确保能够获得高品质的培养产品，从而提升细胞培养的效率。

细胞处理与运输

细胞在收到后，需首先用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后放置在超净台内进行无菌操作。细胞瓶应放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以帮助细胞恢复状态。在显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将作为售后依据，如未提供照片则默认为收到状态良好。

贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养基，用不含钙镁的PBS冲洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况。当绝大多数细胞变圆并脱落时，加入5ml完全培养基终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，保留细胞沉淀。

4. 以1:2的比例将细胞悬液分瓶传代，补充新鲜的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂细胞培养箱继续培养。

细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞变圆后添加培养基终止消化。离心后，将细胞沉淀与1ml的无血清冻存液混匀，然后填入冻存管中，最后将冻存管放入-80℃冰箱，待24小时后可转移至液氮罐中。

在整个细胞培养和冻存过程中，确保严格遵循无菌操作标准，以减少污染，提高细胞存活率和生长效率。选择鸿运国际的产品，可以有效提升细胞实验的成功率，确保研究的顺利进行。